前体化合物和诱导子对内生真菌XT5产紫杉醇的影响及其发酵条件优化_论文

发布于:2021-10-25 02:29:03

.-— — 4 2.   6 - — — 江苏农业科学 2 1 年第 3 01 9卷第 3期  胡  凯, 王 微.前体化合物和诱 导子对 内生真菌 XT 5产紫杉 醇的影 响及其发酵条件优化[ ] J .江苏农业科学 ,0 l 3 ( ) 42— 6   2 1 ,9 3 :6 4 4 前体化合 物和诱导子对 内生真菌 X 5产紫杉醇  T 的影 响及其发酵条件优化  胡  凯 ,王 微  ( 重庆文理学院生命科学与技术学院 , 重庆永川 4 2 6 ) 0 10  摘要 :研究了添加前体化合物和诱导子对 内生真菌 X 5 Etso as. 发酵培养生产紫杉醇产 量的影响 。试 验  T ( c t m  p ) or 结果表 明: p 在 H值 为 7的发酵 培养 基 添加 1  g L苯 丙 氨酸 、0  ̄ o L茉莉 酸 甲酯 、  g L水 杨 酸后 , 8℃ 、 0m / 8 l / 4m / 2   20rr n 0   a 培养 1  , 高效 液相 色谱 检测 , /i 5d 经 紫杉醇产量达 3 6 64 t / , 6 .5 z L 较优化前提高 3 .8   g 2 4 %。 关键词 :内生真菌 ;紫杉醇 ; 前体化合物 ; 导子  诱 中图分类号 : 96 Q 3  文献标 志码 :   A 文章编号 :0 2—10 (0 1 0 0 6 10 3 2 2 1 ) 3— 4 2一o  3 床上 2 8℃黑暗培养 3d   。 1 22 发酵培养 .. 培养 。   12 3 紫杉醇提取 .. 将发 酵液 40 0rr n离 心, 上清液   0 / i a 取 于 6  Oq c下旋转蒸发至 1 1 /0体积后 , 加入等体积 乙酸乙酯在  将 X 5的种 子发 酵液接种于含 100mL T   0    发 酵用培养基 的摇瓶 中 , 在恒温 摇床 上 20 rmn黑暗振 荡  0  / i Wai 17 n 等 9 1年从短叶红 豆杉 的树 皮中最早分离得 到紫  杉醇… 。由于其独特的抗癌机制 , 目前 紫杉醇 已成为世界 上  销售额最大的抗癌药物 。为 了解 决药 源紧缺状况 , 国内外 学  者对红豆杉新品种培育 、 紫杉醇化学人工合成 、 红豆杉细胞培  养 和产 生 紫 杉 醇 内生 真 菌 发 酵 等 方 面 做 了 大 量 研 究 工  作 。 。其 中利用 内生真菌发酵生产紫杉醇是一种具 有工业    化生产希望 的方法 ; 但其 主要 缺点是产 率太低 。笔者 所在实  超声波下萃 取 lh 收集 乙酸 乙酯层 , 淀的菌体用组 织捣碎   , 沉 仪处理后 , 经低温冻融 2次 , 加入一定量 乙酸 乙酯用超声波 细  胞破碎仪破碎细胞。加入 等体积 乙酸 乙酯超声波提取 1 ,   收  h 集乙酸乙酯 层。菌体沉淀和上清液再加入等体积的乙酸乙酯  超声波提取 2次。合并 乙酸 乙酯层 , 于 5 并 0℃下旋转蒸发 至  验室从重 庆缙 云 山的南方 红豆 杉 ( a u cias a.抛 M  Txs h nivr   n s — r) e 中分离到 1 i 株产紫杉醇内生真菌 X 5 E t t m   . 初  T ( c s o as ) or p 步发酵产量约 为 2 67 54 /   。本试验就添加前体化合  7 .5  g L 物及 诱导子时产紫杉醇 内生真菌 的发 酵条件进行 了研究 , 为  进一步通 过基 因工程等方法提高紫杉醇产量提供依据 。   1 材 料 与 方 法  1 1 材 料  . 干, 加入适量 甲醇溶解洗涤 固体 , 再加 人体积 比为 1:1的二  氯 甲烷 一水混合液萃取 后 , 二氯 甲烷层 4 将 5℃旋转 蒸发 至  于, 用少量 乙醇溶解过滤 。   12 4 紫杉醇定 量分 析 .. 采 用 高效液 相色 谱 ( P C) 进  HL 法 行定量分 析。高 效 液 相色 谱 条 件 : 动 相 为  ( 流 甲醇 ):V   ( )= 5: 5 反向 C8 (5   m x4 6 m 5 t , 速  水 6 3; 1 柱 20 m   .  m,  m) 流 x 1mJm n 柱温为室温 ,   l i。 进样量 l  , 0 用紫杉 醇标 准 品作 对  菌株 : T ( c s o as. , X 5 Et t m  p ) 笔者所 在实验室保存 。 or   种子培养基 : 马铃薯 20 g 去皮 煮汁 , 0  ( 过滤 取液 ) 蔗糖  , 2  ,(1L   0g才   。 发酵培养基 : 葡萄糖 5g L 蔗糖 1  L, 白胨 1 / ,  / , 5 蛋   L 醋  g 酸钠 1 g L M S 42 5 m / , a( O ) 1  g L C S 4   / , g O  .  g L C N 3 2 0 m / , u O    1  / Z S 45 0 mg L, n O    mg L, C1 .5 / Mn 2  2  mg L, e I 2 / F C 3  mg L,   /   照 , 2 8a 于 2 m作定性及定量检测。   12 5 其他生物测定方法 .. 发酵液 p H值测定 : 1  取 0mL发  酵液 40 0rmn离心 1 i , 0  i / 0m n 取上清液 , p 用 H计测定 p H值 。   菌体 生物量测定 : 10m 取 0   L发酵液 40 0rri  0   a n离心 1  i, / 0rn  a 弃上清液 , 称量菌体 , 比例计算鲜重。 按   12 6 最佳 培 养 条 件 的 确 定 .. 测 定 在 不 同 温 度 、 同 初 始  不 K 2 O 0   gL , H P  10 m / 维生素 B 5mgL 维生 素 B   g L 甲     / , 6 m/

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